雜種細(xì)胞的選擇方法

    經(jīng)融合處理后會形成各種各樣的融合產(chǎn)物，它們在培養(yǎng)條件下有著不同命運(yùn)。未熔合的原生質(zhì)體和同源融合的原生質(zhì)體較快地適應(yīng)培養(yǎng)條件而生長發(fā)育，而異源融合體，特別是遠(yuǎn)源不親和的雜種細(xì)胞在不經(jīng)過選擇的情況下，常常因它們發(fā)育緩慢而受到有時生長的親本原質(zhì)體融合細(xì)胞的抑制，不易發(fā)育成雜種。因此人們設(shè)計了一些選擇體系，有限選擇雜交細(xì)胞，或只允許雜種細(xì)胞生長，以淘汰親本細(xì)胞。

   zui簡單的選擇方法是利用雙親細(xì)胞形態(tài)和色澤上的差異來識別雜種細(xì)胞，但多數(shù)是依據(jù)下述細(xì)胞生理以創(chuàng)傷的特性來選擇。

1. 互補(bǔ)生長。親本原生質(zhì)體生長要求外源激素，有時雜種細(xì)胞由于雙親的互補(bǔ)作用，產(chǎn)生內(nèi)院激素，從而使得雜種細(xì)胞能再無激素的培養(yǎng)基上生長。
2. 營養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)。如果一個親本是需要鹽酸的缺陷，另一個是葉綠體缺陷型病要求葡萄糖的突變體，這兩者融合，可在無煙酸的培養(yǎng)基上選擇雜種。
3. 白話體和野生型互補(bǔ)。如果某一些葉綠體缺失突變體能在限定的培養(yǎng)基上生長分化，而另一正常的親本在同樣培養(yǎng)基上不能發(fā)育成打的細(xì)胞團(tuán)，融合后在限定培養(yǎng)基上選擇綠色的愈傷組織或幼苗
4. 抗性互補(bǔ)選擇。對抗性突變體或抗藥性有差異的材料可采用這種方法，如下圖

（5）機(jī)械分離方法。以上所講的各種選擇系統(tǒng)，都要求有各種突變體，然而在植物中，目前還很難做到象在微生物中那樣有許多突變體可供利用。因此機(jī)械分離方法有很大意義。

（6）用離心方法可以把異核體與親本原生質(zhì)體分開，從而獲得融合體。采用顯微操作技術(shù)，也能把單個異核體分離出來進(jìn)行培養(yǎng)。這兩種方法仍然是依據(jù)雙親原生質(zhì)體和融合體的區(qū)別來挑選異核體的，在應(yīng)用上仍有限制。現(xiàn)在科學(xué)家發(fā)明了普遍使用的犯法，即采用無毒性的英冠標(biāo)記雙親原聲質(zhì)體，如果是融合細(xì)胞，就必定會具有與雙親不同的熒光標(biāo)記。融合反應(yīng)后，利用一種電子熒光激活選擇器自動分類和選擇融合細(xì)胞，這是一種很有前途的選擇雜種細(xì)胞的方法，預(yù)計極愛那個會在原聲質(zhì)體融合融合選擇體細(xì)胞雜種中得到實(shí)際應(yīng)用。