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吉姆薩染色液(Giemsa stain,1:9,染色體專用)說(shuō)明書

更新時(shí)間:2021-07-27點(diǎn)擊次數(shù):6437

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

Giemsa Stain以進(jìn)口的姬姆薩色素、甲醇為主要原料,含*襯染劑,經(jīng)研磨配制而成,能呈現(xiàn)出清晰的細(xì)胞染色效果,經(jīng)常用于組織切片、血液和細(xì)胞涂片、細(xì)菌、染色體顯帶、原生動(dòng)物寄生蟲等染色。吉姆薩色素(又稱姬姆薩色素)是由天青Ⅱ與伊紅混合而成,Giemsa染色原理和結(jié)果與瑞氏染色基本相同,姬姆薩染色液對(duì)胞漿著色力較強(qiáng),能較好的顯示胞漿的嗜堿性程度,特別是對(duì)血液和骨髓細(xì)胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜堿性顆粒,著色清晰,但是對(duì)胞核著色偏深,核結(jié)構(gòu)顯色不佳,故姬姆薩染液常與瑞氏染 液聯(lián)合使用。

許多染料對(duì)DNA都有不同程度的親和性,故都可用作染色體的染色。在染色體的常規(guī)染色中,一般用吉姆薩、地衣紅、福爾根、石碳酸復(fù)紅等都可獲得良好的染色效果。G顯帶技術(shù)是指將染色體玻片標(biāo)本經(jīng)過(guò)胰蛋白酶處理后,再用吉姆薩進(jìn)行染色,使每條染色體沿其長(zhǎng)軸顯示出一定數(shù)量的、寬窄和深淺不同的橫紋,即帶型。由于人類22 種常染色體和X、Y 染色體的帶型各具特征,根據(jù)帶型可清楚地分辨出每條染色液。GiemsaStain(1:9,染色體專用)由10×儲(chǔ)存液和磷酸鹽緩沖液組成,1:9 混合后使用,主要用于染色體G帶染色。 

自備材料:

1.PHA、秋水仙素

2.0.075M 溶液

3.恒溫培養(yǎng)箱

4.甲醇乙酸固定液(甲醇:冰乙酸=3:1)

5.載玻片、顯微鏡

操作步驟(僅供參考):

1、配制 Giemsa Stain 工作液:按試劑(A):試劑(B)=1:9 混合,即取1份 Giemsa Stain 儲(chǔ)存液(10×)加入到9份的磷酸鹽緩沖液中充分混勻,即為GiemsaStain工作液,該工作液為即用型試劑,不易保存,即用即配。如效果不佳,可改變配制比例。

2、培養(yǎng):取人類外周血3~5ml在PHA(一般工作濃度約60ug/ml)、血清等條件下體外培養(yǎng)3天,加入BrdU和(或)秋水仙素(一般工作濃度約0.5ug/ml),培養(yǎng)30~60min并收集細(xì)胞即2000g離心5min,留取沉淀。

3、低滲:加入5~8ml提前37℃預(yù)熱的0.075M溶液37℃低滲處理20~30min。

4、固定:加入1ml新配制的甲醇乙酸固定液,輕輕混勻,2000g離心5min,留取沉淀;再次加入2~3ml甲醇乙酸固定液,輕輕混勻,室溫固定15~20min,2000g離心5min,留取沉淀;再次加入2~3ml 甲醇乙酸固定液,重復(fù)該步驟,留取沉淀。

5、滴片:加入少許甲醇乙酸固定液至沉淀中,輕輕混勻制成細(xì)胞懸液。滴加2~3滴細(xì)胞懸液于提前遇冷的載玻片上,吹散水蒸氣熏蒸促使細(xì)胞破裂(亦可高空垂直滴下細(xì)胞懸液促使細(xì)胞破裂),70℃烤片2h。

6、消化:用0.025~0.05%的胰蛋白酶溶液處理載玻片30~90min,依據(jù)胰蛋白酶的濃度、批次等摸索處理時(shí)間。

7、染色:滴加Giemsa Stain工作液覆蓋玻片,室溫染色15~30min。

8、用自來(lái)水或蒸餾水緩慢從載玻片一端沖洗,將多余染色液沖掉。空氣干燥。

9、先用低倍鏡瀏覽整張玻片標(biāo)本,找到分散良好且染色體長(zhǎng)短適中的分裂相,再用油鏡觀察并識(shí)別染色體G顯帶核型。

注意事項(xiàng):

1、涂片染色中Giemsa染色后,請(qǐng)勿先去除染液或直接對(duì)涂片用力沖洗。

2、如果染色過(guò)深或過(guò)淺,應(yīng)調(diào)整染色時(shí)間或工作液濃度。

3、pH 值對(duì)染色有一定影響,載玻片應(yīng)清潔、無(wú)酸堿污染,以免影響染色效果。

4、染色液經(jīng)稀釋后液面有金屬光澤則表示染液有染色作用,否則染色液可能失效。

5、染色液可重復(fù)使用,但不能多次重復(fù),若有沉淀物應(yīng)過(guò)濾后使用。 

 

 

 

有效期:24個(gè)月有效。 


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