產(chǎn)品簡介：

植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀，常以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖。可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性通過測定水解后的單糖含量對總糖進(jìn)行測定。

DNS 試劑(Ghose 法)主要成分是苯酚、氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉、亞硫酸氫鈉和 3,5-二硝基水楊酸，可用于測定植物總糖和還原糖的檢測，其原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在 540nm 處測定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測得樣品中的還原糖和總糖的含量。本試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、蒸餾水

2、50ml 離心管

3、離心機(jī)

4、水浴鍋或恒溫箱

5、分光光度計(jì)

6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

操作步驟(僅供參考)：

1、還原糖的提取：

①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②50℃水浴 30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖*浸出。

③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。

④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心 5min。

⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測液。

2、總糖的水解和提取：

①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12ml 蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時(shí)攪拌。

③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液，檢查水解是否*，如已經(jīng)水解*則不顯示藍(lán)色。

④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至 7.4 左右，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過濾，獲得上清或?yàn)V液。

⑤取上清或?yàn)V液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取1ml 總糖水解液，測定其還原糖的含量。

3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，以 0 號調(diào)零，檢測 540nm 處吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、還原糖測定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液 1ml，分別加入 DNS 試劑 2ml， 其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，540nm 處測定各管的吸光度。

計(jì)算：

還原糖的百分含量：

還原糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100

總糖的百分含量：

總糖含量(%)=(C×VT)/(m×Vs)×100×10×0.9

式中：

     C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg)

 VT=提取液的體積(ml)

 m=植物樣品的質(zhì)量(mg)

Vs=測定時(shí)用的樣品體積(ml)

DNS 試劑(Ghose法)注意事項(xiàng)：

1、 該試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降，盡量避光保存。

2、 稀釋鹽酸和氫氧化鈉溶液時(shí)，應(yīng)小心操作，避免傷人。

3、 一般市售的濃鹽酸摩爾數(shù)約為 11.6M，應(yīng)稀釋至 6M 后使用。

4、 待測樣本如不能及時(shí)測定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。

5、 如果樣品還原糖濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

6、 總糖計(jì)算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時(shí)使用，×0.9 是為了從測定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。

有效期： 12 個(gè)月有效。