微量法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

木質素是構成植物細胞壁的成分之一，是由聚合的芳香醇構成的一類物質，存在于木質組織中，主要作用是通過形成交織網來硬化細胞壁。木質素主要位于纖維素纖維之間，起抗壓作用。

測定原理

木質素中的酚羥基發生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低與木質素含量正相關。

需自備的儀器和用品

天平、40 目篩，玻璃試管、燒杯、離心機，恒溫水浴鍋、烘箱、封口膜、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、高氯酸。

試劑組成和配制

試劑一：液體 50mL×2 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 100mL×2 瓶，4℃保存。

樣品處理

樣品 80℃烘干至恒重，粉碎，過 40 目篩，稱取約 5mg（記為 W）于 10mL 玻璃試管中（務*玻璃試管，不可用 Ep 管）

測定操作表

計算公式

用微量石英比色皿計算公式如下：

標準曲線：y = 0.02776x+0.0068，R² =0.9889

Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0068)÷0.02776×V 反總×10 ^-3 ÷W×T

=0.0735×(ΔA-0.0068) ÷W×T

V 反總：反應總體積：2.04mL；W：樣本質量，g；T：稀釋倍數

用 96 孔板計算公式如下：

標準曲線：y = 0.01388x+0.0034，R² =0.9889

Lignin（mg/g 干重）= (ΔA-0.0034)÷0.01388×V 反總×10 ^-3 ÷W×T

=0.1470×(ΔA-0.0034) ÷W×T

V 反總：反應總體積：2.04mL；W：樣本質量，g；T：稀釋倍數

注意事項

1. 試劑一有毒性，請操作時做好防護措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。

2. 加熱過程中有劇烈反應，震蕩時輕搖，以免壓力過大噴出造成人身傷害。

3. 試劑三具有強刺激性，建議操作過程全部在通風櫥子操作。

4. 取上清加試劑三步驟根據自己樣品乙酰化程度，試劑三的用量可調整，保證吸光值在0.1-0.8之間即可，并在公式中參與計算。

5.乙酰化測定木質素含量如受到實驗環境的影響，可自行制作標準曲線。