本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于檢測牛血清，血漿及相關液體樣本中結核病（TB）水平。

實驗原理：

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中結核病（TB）。用純化的牛結核病（TB）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中結核病（TB）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的結核病（TB）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色， 并在酸的作用下轉化成終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標本中牛結核病（TB）的存在與否。

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/ 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。?

結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為結核病（TB）陰性

陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為結核病（TB）陽性

注意事項

1. 操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2. 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3. 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

4. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5. 底物請避光保存。

6. 試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm

7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1. 試劑盒保存：；2-8℃。

2. 有效期：6 個月