動物細胞/組織細胞核粗提分離試劑盒產品說明書（中文版）

主要用途

        動物細胞/組織細胞核粗提分離試劑是一種旨在從動物細胞或組織中分離出完整而純化的細胞核細胞器的經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于動物組織和培養細胞的細胞核的制備。其制備物產量高，可以被用于后續EMSA、體外轉錄反應、核轉錄終止（run-off）實驗、轉錄圖譜分析（profiling）、體外核凋亡檢測、以及核染色質、基因組DNA、核RNA/RNP、組蛋白的純化等實驗。產品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能穩定。

技術背景

    細胞核是細胞中大的細胞器，細胞核的分離是現代細胞生物學研究的常用的手段之一。細胞核結構和功能的研究，包括細胞核的系列活動、染色質結構、基因表達的轉錄調節、RNA合成和操作、核雙向轉運的調節機制、核凋亡等。從任何組織或細胞分離細胞核的技術方法基本上采用：一，通過機械或溫和低滲化學方法破裂細胞；第二，通過低速差速離心獲得粗提細胞核；第三，通過等密度離心獲得高純度的細胞核，去除所有細胞漿成分，例如微粒體、線粒體、神經髓鞘成分，尤其是與核膜相連的粗面內質網。 

產品內容

清理液（Reagent A）   120毫升

裂解液（Reagent B）    50毫升

保存液（Reagent C）     5毫升

產品說明書 1份

保存方式

      保存裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反復凍融；其余的保存在4℃冰箱里；裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent ）嚴格無菌操作；有效保證6月

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（GMS12028）或PBS緩沖溶液（GMS12033）：用于清理細胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于細胞脫離

*細胞培養液（GMS12052）：用于中和胰蛋白酶的細胞培養基

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

4℃臺式離心機：用于樣品操作

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織和細胞

實驗步驟

一、動物組織細胞核分離

• 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量
• （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入適量的（1克組織需要5毫升）清理液（Reagent A）清洗1次

• 移入到一個液氮凍存管
• 即刻放入液氮罐過夜

• 次日從液氮罐里取出，即刻（快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 轉移到一個預冷的15毫升錐形離心管
• 加入預冷的5毫升裂解液（Reagent B）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 置于冰槽里孵育10分鐘
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
• 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20下）（注意：參見注意事項6）
• 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心15分鐘，速度為500g
• 小心抽去上清液
• 加入200微升預冷的保存液（Reagent C），混勻沉淀顆粒
• 即刻移入到預冷的1.5毫升離心管
• 放進－70℃冰箱里保存

二、動物細胞細胞核分離

• 準備5至10瓶75cm²細胞培養瓶的細胞（5 X 10⁷），直至細胞生長鋪滿整個培養表面
• 分別加入10毫升用戶自備的HANK平衡鹽緩沖溶液或PBS緩沖溶液到每個細胞培養瓶，覆蓋培養瓶表面，然后抽去
• 重復實驗步驟2一次
• 加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養平面
• 置入37℃培養箱3分種
• 輕輕手擊震動培養瓶，使細胞脫落
• 分別加入10毫升用戶自備的*細胞培養液
• 移入一個50毫升錐形離心管
• 放入臺式離心機離心10分鐘，速度為200g
• 小心抽去上清液
• 加入10毫升預冷的清理液（Reagent A），混勻細胞
• 放入臺式離心機離心10分鐘，速度為300g
• 小心抽去上清液
• 加入預冷的5毫升裂解液（Reagent B）
• 渦旋震蕩5秒，充分混勻
• 置于冰槽里孵育10分鐘
• 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器
• 在冰槽里用勻漿棒勻化細胞（約20下）（注意：參見注意事項6）
• 將所有細胞勻漿物移入15毫升錐形離心管
• 放進4℃臺式離心機離心15分鐘，速度為500g
• 小心抽去上清液
• 加入200微升預冷的保存液（Reagent C），混勻沉淀顆粒
• 即刻移入到預冷的1.5毫升離心管
• 放進－70℃冰箱里保存

注意事項

• 本產品為10次操作（1克動物組織或5 X 10⁷細胞）
• 所有操作均須在4℃或以下狀態進行
• 操作時，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent C）
• 建議使用足夠的組織或細胞量
• 建議嚴格控制操作時間
• 通常勻化次數為20下（或細胞顆粒群/組織塊狀消失為止）達到80％的細胞裂解為理想狀態，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以使用臺酚藍染色，通過顯微鏡觀察3微升勻漿物，觀察細胞裂解程度和計量細胞核（注意：建議使用純化細胞核臺酚藍染色試劑盒——GMS10448）
• 通常1克動物組織或5 X 10⁷細胞的細胞核得率為50%以上（細胞核計數）

8． 如果需要獲得99％以上純度的細胞核，建議使用動物細胞/組織細胞核高純超離分離試劑盒－GMS10100.3

• 本公司提供系列細胞核分析試劑產品

質量標準

• 本產品經鑒定性能穩定
• 本產品經鑒定分離的細胞核完整
• 本產品經鑒定分離的細胞核維持正常活性
• 本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶