在ELISA試劑盒測定中試劑的準備zui為關(guān)鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。其次，目前的商品elisa試劑盒中的洗板液均需在實驗室使用時對所提供的濃縮液稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。

　　此外，當試劑盒以O(shè)PD為底物時，則底物溶液應(yīng)在反應(yīng)顯色前臨時配制。

　　一、方法學的影響

　　ELISA測定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法（HBeAb,HBcAb等采用）因受操作時差所引起的競爭等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

　　二、試劑因素

　　不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過批批檢的項目其檢測結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號的試劑，并保證保存條件。嚴格執(zhí)行這一標準可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。

　　三、樣本因素

　　標本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反復(fù)凍融等。

　　四、ELISA試劑盒操作因素對ELISA結(jié)果的影響

　　ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當將引起較大的誤差。ELISA試劑盒操作步驟有1.加樣2.溫育3.洗滌4.顯色5.比色這些過程中但凡一個步驟不小心都會影響到ELISA試劑盒檢測的質(zhì)量。