ELISA試劑盒在實際應用的過程中，得通過不同的設計，不好走和方法都是有很多種類的，像是接法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法測IgM抗體、應用親和素和生物素的ELISA。今天小編就跟大家講講ELISA方法設計都有哪些原理？

　　ELISA試劑盒以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

　　應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。

　　ELISA試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品的濃度。

　　ELISA如何保證測定溫度?

　　為了保證測定的準確性，通常要求測定條件*一致。對于操作而言，主要是測定溫度加液體積、加液順序和反應時間一致。保證測定溫度一致的措施通常如下。

　　優先選用帶溫控裝置的儀器，如上等分光光度計或者酶標儀，可以直接設定需要的溫度。但是要注意預熱。

　　打開房間的空調，根據天氣情況設定制冷或者加溫，并且待室溫穩定后再開始測定。

　　提前一小時冰箱中取出試劑，放到室溫中。還可以利用水浴鍋保溫反應體系中體積zui大的試劑，通常是緩沖液。這樣，即使不是測定溫度，但是可以保證不同樣品基本在幾乎同樣的溫度下測定。注意，待保溫的試劑應該先放到水浴鍋中，然后加溫到溫度，這樣可以保證試劑溫度與水浴鍋溫度一致；或者待保溫試劑要在已經達到溫度的水浴鍋中保溫超過半小時以上。

　　如果當地溫差變化大，一定要注意調整室溫。